8th Cuban Congress on Microbiology and Parasitology, 5th National Congress on Tropical Medicine and 5th International Symposium on HIV/aids infection in Cuba

Title

AUMENTO DE LA SENSIBILIDAD ANALÍTICA DEL SISTEMA DIAGNÓSTICO FasciDIG®: EMPLEO DE UN ANTICUERPO POLICLONAL MONOESPECÍFICO CONTRA ANTÍGENOS RECONOCIDOS POR EL ANTICUERPO MONOCLONAL ES-78

Authors

Ricardo Marcet Sánchez , Annia Alba Menéndez , Hilda Hernández Alvarez , Mabel Figueredo Pino , Jorge Sarracent Pérez

Abstract


La fasciolosis en Cuba es causada por el tremátodo Fasciola hepatica y constituye una enfermedad enzoótica en el ganado con incremento, en los últimos años, del número de casos de humanos infectados. El diagnóstico copro-parasitológico de la fasciolosis es poco sensible y laborioso, por lo que es importante el uso de los métodos inmuno-enzimáticos sobre todo aquellos que son capaces de detectar antígenos del parásito en las heces. En el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" se cuenta con un sistema de detección de antígenos en heces de humanos y animales denominado FasciDIG® con una sensibilidad reportada de hasta 3,8 ng/mL. El objetivo de este trabajo fue aumentar la sensibilidad analítica de este sistema, sustituyendo el anticuerpo policlonal de conejo, purificado por cromatografía de intercambio iónico, empleado como conjugado (FasciDIG®)  por otro similar purificado por inmuno-afinidad contra el antígeno específico (FasciDig modificado). Ambos ensayos, fueron evaluados en un sistema simulado, utilizando diluciones seriadas dobles de antígenos del parásito a concentraciones desde 1000 ng/mL hasta 0,95 ng/mL. El límite de detección obtenido para el FasciDIG modificado fue menor que en el caso del FasciDIG®, detectando hasta 1,95 ng/mL del antígeno. Se compararon ambos sistemas utilizando heces colectadas del recto de 70 reses destinadas para sacrificio y se verificó la presencia o no de los parásitos a través de la observación directa del hígado. Este sistema podría ser utilizado como alternativa para el diagnóstico del parásito.

References


1. Mas-Coma S. Human fascioliasis. En: Cotruvo JA, Dufour A, Rees G, Bartram J, Carr R, Cliver DO, et al., editors. Waterborne zoonoses: Identification, causes and control. London, UK: World Health Organization (WHO); 2004. p. 305-22.

2. Mas-Coma S. Epidemiology of fascioliasis in human endemic areas. J Helminthol. 2005;79:207-16.

3. Karahocagil MK, Akdeniz H, Sunnetcioglu M, Cicek M, Mete R, Akman N, et al. A familial outbreak of fascioliasis in Eastern Anatolia: a report with review of literature. Acta Trop. 2011;118:177-83.

4. Maguire JH. Schistosomiasis. En: Mandel GL, Bennett JE , Dolin R, editors. Trematodes and other flukes. New York: Churchill Livingstone; 2005: 3276-85.

5. Charlier J, Meulemeester L, Claerebout E, Williams D, Vercruysse J. Qualitative and quantitative evaluation of coprological and serological techniques for the diagnosis of fasciolosis in cattle. Vet Parasitol 2008;153:44-51.

6. Rojas L, Vazquez A, Domenech I, Robertson LJ. Fascioliasis: can Cuba conquer this emerging parasitosis? Trends Parasitol. 2010;26:26-34.

7. Espino AM, Marcet R, Finlay CM. Fasciola hepatica: detection of antigenemia and coproantigens in experimentally infected rats. Exp Parasitol. 1997;85:117-20.

8. Espino AM, Marcet R, Finlay CM. Detection of circulating excretory secretory antigens in human fascioliasis by sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. J Clin Microbiol. 1990;28:2637-40.

9. Mezo M, Gonzalez-Warleta M, Carro C, Ubeira FM. An ultrasensitive capture ELISA for detection of Fasciola hepatica coproantigens in sheep and cattle using a new monoclonal antibody (MM3). J Parasitol. 2004;90:845-52.

10. Espino AM, Diaz A, Perez A, Finlay CM. Dynamics of antigenemia and coproantigens during a human Fasciola hepatica outbreak. J Clin Microbiol. 1998;36:2723-6.

11. Espino AM. Inmunodianóstico de la Fasciolosis humana y su aplicación en brotes epidémicos [Doctoral thesis]. La Habana: Departamento de Parasitología, Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí"; 1997. p. 65.

12. Marcet R, Figueredo M, Núñez FA, Rojas L, Sarracent J. Incremento de la sensibilidad analítica del sistema FasciDIG® para el diagnóstico de Fasciola hepatica Revista Cubana de Medicina Tropical. 2012; 64(3):335-34113.

13. Ubeira FM, Muino L, Valero MA, Periago MV, Perez-Crespo I, Mezo M, et al. MM3-ELISA detection of Fasciola hepatica coproantigens in preserved human stool samples. Am J Trop Med Hyg. 2009;81:156-62.

14. Espinoza JR, Maco V, Marcos L, Saez S, Neyra V, Terashima A, et al. Evaluation of Fas2-ELISA for the serological detection of Fasciola hepatica infection in humans. Am J Trop Med Hyg. 2007;76:977-82.